2021年8月17日，CDE發(fā)布《人源性干細(xì)胞產(chǎn)品藥學(xué)研究與評(píng)價(jià)技術(shù)指導(dǎo)原則（征求意見稿）》。
人源性干細(xì)胞產(chǎn)品藥學(xué)研究與評(píng)價(jià)技術(shù)指導(dǎo)原則（征求意見稿）
一、前言
2017 年，原國(guó)家食品藥品監(jiān)督管理總局發(fā)布《細(xì)胞治療產(chǎn)品研究與評(píng)價(jià)技術(shù)指導(dǎo)原則(試行)》，對(duì)細(xì)胞治療產(chǎn)品按照藥品管理相關(guān)法律法規(guī)進(jìn)行研發(fā)時(shí)的技術(shù)要求進(jìn)行了總體闡述。
為進(jìn)一步規(guī)范和指導(dǎo)干細(xì)胞產(chǎn)品的藥學(xué)研發(fā)和申報(bào)，促進(jìn)干細(xì)胞產(chǎn)業(yè)發(fā)展，特制定本技術(shù)指導(dǎo)原則。
本指導(dǎo)原則的目的是基于現(xiàn)有認(rèn)識(shí)，對(duì)按藥品進(jìn)行開發(fā)的干細(xì)胞產(chǎn)品從研發(fā)到上市階段藥學(xué)研究技術(shù)問題提供建議，藥物研發(fā)者亦可根據(jù)干細(xì)胞產(chǎn)品研發(fā)的實(shí)際情況，采用其他更有效的方法和手段進(jìn)行干細(xì)胞產(chǎn)品開發(fā)，但是必須符合藥物研發(fā)的規(guī)律，并提供科學(xué)合理的依據(jù)。
按照藥品進(jìn)行研發(fā)和注冊(cè)申報(bào)的干細(xì)胞產(chǎn)品需接受國(guó)家藥品監(jiān)督管理局（NMPA） 的監(jiān)管，符合《中華人民共和國(guó)藥品管理法》、《藥品注冊(cè)管理辦法》、《中華人民共和國(guó)藥典》等相關(guān)法律法規(guī)的要求。
供人體使用的干細(xì)胞產(chǎn)品的生產(chǎn)全過程應(yīng)當(dāng)符合《藥品生產(chǎn)質(zhì)量管理規(guī)范》（GMP）的基本原則和相關(guān)要求。
二、適用范圍
本指導(dǎo)原則中“干細(xì)胞產(chǎn)品包括由人源性的成體干細(xì)胞（adult or somaticstem cells，ASCs/SSCs）、人胚干細(xì)胞（human embryonic stem cell, hESCs）、誘導(dǎo)性多能干細(xì)胞（induced pluripotent stem cells，iPSCs）擴(kuò)增、誘導(dǎo)分化，或成熟體細(xì)胞轉(zhuǎn)（分）化獲得的干細(xì)胞及其衍生細(xì)胞，與輔料相混合，分裝至特定容器，符合特定藥品放行標(biāo)準(zhǔn)，可直接應(yīng)用患者,也可與組織工程材料一起用于患者的治療產(chǎn)品。
三、一般原則
干細(xì)胞產(chǎn)品具備來源和組成復(fù)雜、細(xì)胞類型多樣、細(xì)胞本身具備體內(nèi)生存、自主增殖或/和分化的能力、產(chǎn)品生產(chǎn)規(guī)模和生產(chǎn)工藝差異大、產(chǎn)品作用機(jī)制復(fù)雜等特點(diǎn)，因此，對(duì)干細(xì)胞產(chǎn)品的生產(chǎn)工藝設(shè)計(jì)與驗(yàn)證、質(zhì)量研究和控制等應(yīng)充分考慮以上基本特征，如應(yīng)有明確合理的供者細(xì)胞來源和篩選標(biāo)準(zhǔn)，選擇可有效保持細(xì)胞活力和活性的包裝系統(tǒng)及儲(chǔ)存運(yùn)輸條件。
干細(xì)胞產(chǎn)品應(yīng)遵循循序深入、逐步遞進(jìn)的藥物開發(fā)規(guī)律，在申報(bào)臨床階段原則上應(yīng)滿足開展臨床試驗(yàn)安全性的要求，臨床試驗(yàn)期間繼續(xù)完善生產(chǎn)工藝和產(chǎn)品質(zhì)量等相關(guān)研究，在上市申請(qǐng)時(shí)應(yīng)提供支持產(chǎn)品安全、有效、質(zhì)量可控的完整的研究數(shù)據(jù)。
干細(xì)胞產(chǎn)品的研發(fā)生產(chǎn)流程包括從供體材料的獲取、運(yùn)輸、接收、產(chǎn)品生產(chǎn)和檢驗(yàn)到成品放行、儲(chǔ)存和運(yùn)輸?shù)娜^程，符合細(xì)胞治療產(chǎn)品的一般規(guī)律，在適用本指導(dǎo)原則的同時(shí)，還適用其它有關(guān)的生物制品一般指導(dǎo)原則（1~7）。
四、風(fēng)險(xiǎn)評(píng)估與控制
除了一般生物制品的常見風(fēng)險(xiǎn)外，干細(xì)胞產(chǎn)品的風(fēng)險(xiǎn)還包括污染和交叉污染的風(fēng)險(xiǎn)（供者、原材料、操作過程）、高風(fēng)險(xiǎn)起始原材料（ESCs/iPSCs、基因遞送與修飾系統(tǒng)）殘留的風(fēng)險(xiǎn)、加工過程中非目的細(xì)胞、非預(yù)期變化等雜質(zhì)的風(fēng)險(xiǎn)、生產(chǎn)工藝變更的風(fēng)險(xiǎn)和干細(xì)胞產(chǎn)品的其他質(zhì)量風(fēng)險(xiǎn)因素。
影響干細(xì)胞產(chǎn)品質(zhì)量的風(fēng)險(xiǎn)因素具體包括但不限于：（1）供體年齡、健康情況等(8)；（2）細(xì)胞的來源（自體、同種異體、iPSC 來源等）、生物學(xué)特性（增殖、分化、遷移能力、與目標(biāo)治療組織的譜系接近程度）以及基因突變等；（3）細(xì)胞的生產(chǎn)過程操作（體外培養(yǎng)/擴(kuò)增/誘導(dǎo)/分化/遺傳操作/冷凍保存/復(fù)蘇等）及操作復(fù)雜程度對(duì)細(xì)胞特性的影響，如基因修飾對(duì)細(xì)胞基因組的影響；（4）細(xì)胞體外暴露于特定培養(yǎng)物質(zhì)時(shí)間、細(xì)胞培養(yǎng)時(shí)間、細(xì)胞存活情況和細(xì)胞代次等；（5）誘導(dǎo)材料及劑量、誘導(dǎo)時(shí)間、添加處理順序等；（6）給藥方式（皮膚外用、靜脈輸注或經(jīng)手術(shù)應(yīng)用），是否需要對(duì)受者進(jìn)行預(yù)處理，是否和非細(xì)胞產(chǎn)品（生物活性分子或結(jié)構(gòu)材料）形成組合等。
研發(fā)者應(yīng)在綜合考慮各種因素的基礎(chǔ)上，針對(duì)不同類型產(chǎn)品特性和全生命周期過程評(píng)估產(chǎn)品的總體風(fēng)險(xiǎn)，并制定相應(yīng)的風(fēng)險(xiǎn)控制策略。干細(xì)胞產(chǎn)品風(fēng)險(xiǎn)控制策略可能至少應(yīng)該考慮以下方面：
（1）建立清場(chǎng)和隔離操作規(guī)范，關(guān)注對(duì)動(dòng)物或人源性原材料的嚴(yán)格質(zhì)控、對(duì)細(xì)胞庫(kù)和收獲液的分析檢驗(yàn)、對(duì)生產(chǎn)關(guān)鍵節(jié)點(diǎn)無菌、支原體、內(nèi)外源病毒的檢測(cè)與控制等。
（2）做好上下游材料批號(hào)和標(biāo)識(shí)管理，建立完善的可追溯系統(tǒng)，同時(shí)關(guān)注生產(chǎn)過程中的細(xì)胞鑒別檢測(cè)，確保干細(xì)胞產(chǎn)品質(zhì)量屬性合格。
（3）盡量采用連續(xù)、密閉式生產(chǎn)工藝，減少生產(chǎn)過程中的環(huán)境暴露環(huán)節(jié)，避免污染風(fēng)險(xiǎn)。
（4）設(shè)立過程控制指標(biāo)和廢棄指標(biāo)，對(duì)中間體進(jìn)行檢定或質(zhì)量監(jiān)測(cè)，如對(duì)基因修飾的細(xì)胞或細(xì)胞因子誘導(dǎo)分化的細(xì)胞進(jìn)行外源基因的轉(zhuǎn)導(dǎo)效率或細(xì)胞分化情況、細(xì)胞表型和基因型的檢定等。
（5）進(jìn)行全面的生產(chǎn)工藝開發(fā)與驗(yàn)證，開展系統(tǒng)的變更可比性研究，結(jié)合產(chǎn)品特性和工藝開發(fā)持續(xù)進(jìn)行質(zhì)量特性研究，充分表征細(xì)胞形態(tài)、活力、遺傳穩(wěn)定性、成瘤性/致瘤性、細(xì)胞表型特征(包括預(yù)期和非預(yù)期細(xì)胞群)和功能等，尤其關(guān)注影響產(chǎn)品質(zhì)量的雜質(zhì)水平及安全性影響。
五、生產(chǎn)用材料
生產(chǎn)用材料包括干細(xì)胞產(chǎn)品生產(chǎn)過程中使用的所有原材料和輔料。
原材料包括起始原材料（生產(chǎn)用細(xì)胞、輔助細(xì)胞、體外基因遞送與修飾系統(tǒng)）和其它原材料（如培養(yǎng)基和細(xì)胞因子等生化試劑、細(xì)胞分離和組合裝置等耗材）。
輔料的使用應(yīng)符合藥典要求和關(guān)聯(lián)審評(píng)審批的有關(guān)要求。
生產(chǎn)用材料直接關(guān)系到產(chǎn)品質(zhì)量，需參考《中國(guó)藥典》的相關(guān)要求(9,10)進(jìn)行風(fēng)險(xiǎn)評(píng)估和質(zhì)量控制。
（一）原材料
起始原材料
1.1 生產(chǎn)用細(xì)胞
按照藥品開發(fā)的干細(xì)胞產(chǎn)品，一般來源于供者（自體或異體），也可能來源于細(xì)胞庫(kù)。干細(xì)胞的來源和相關(guān)操作應(yīng)符合國(guó)家相關(guān)法律法規(guī)和倫理（11~13）的要求，其使用應(yīng)取得所有人知情同意和授權(quán)。生產(chǎn)干細(xì)胞產(chǎn)品應(yīng)建立穩(wěn)定的生產(chǎn)用細(xì)胞來源，并確保質(zhì)量的一致性。需根據(jù)產(chǎn)品特點(diǎn)建立合理的供者篩查程序和標(biāo)準(zhǔn)，綜合評(píng)估生產(chǎn)細(xì)胞應(yīng)用的安全性與合理性。
1.1.1 供者篩查
供者篩查是干細(xì)胞產(chǎn)品控制風(fēng)險(xiǎn)的重要手段。合理的供者篩查程序和標(biāo)準(zhǔn)對(duì)防范病毒污染、組織排異、遺傳疾病等風(fēng)險(xiǎn)十分必要。對(duì)于細(xì)胞庫(kù)來源的干細(xì)胞產(chǎn)品，生產(chǎn)用細(xì)胞供者應(yīng)為體細(xì)胞/配子的供體。供者的病原微生物篩查方面，尤其對(duì)用于同種異體干細(xì)胞臨床研究的供者，可參考采供血的相關(guān)要求（14），如篩查供者是否存在 HBV、HCV、HIV、梅毒螺旋體等感染。實(shí)際開發(fā)應(yīng)用中，還應(yīng)根據(jù)供體健康/疾病史或區(qū)域流行病區(qū)生活逗留、組織細(xì)胞特異性的易感病原體等具體情況適時(shí)增加相應(yīng)的篩查項(xiàng)目，并列入驗(yàn)收標(biāo)準(zhǔn)。對(duì)于自體來源的干細(xì)胞供者，可根據(jù)來源的組織或器官、干細(xì)胞制劑的特性以及臨床適應(yīng)證等對(duì)供體的質(zhì)量要求和篩查項(xiàng)目和標(biāo)準(zhǔn)進(jìn)行適當(dāng)調(diào)整，應(yīng)確定生產(chǎn)程序等是否會(huì)增加供體中可能存在的病原體傳播風(fēng)險(xiǎn)，并說明采取的預(yù)防措施（為防止病毒或其他外源性因子傳播給自體受者以外的其他人）。為了保證病原體篩查結(jié)果的可靠性，對(duì)供者進(jìn)行篩查的機(jī)構(gòu)應(yīng)具備相關(guān)資質(zhì)，供者篩查過程中盡量采用監(jiān)管機(jī)構(gòu)批準(zhǔn)的血源篩查試劑盒檢測(cè)病原體，檢測(cè)方法應(yīng)經(jīng)過適用性確認(rèn)，關(guān)注檢測(cè)方法靈敏度對(duì)病原微生物的檢出能力。通用型干細(xì)胞產(chǎn)品制備時(shí)必須考慮窗口期對(duì)病原微生物篩查的影響。組織排異方面風(fēng)險(xiǎn)，可參考輸血供體的相關(guān)要求進(jìn)行考慮，比如收集供者的 ABO 血型、HLA-I 類和 II 類分型資料等，需證明供體與受體(病人)的（8）組織分型相匹配，同時(shí)需提供檢測(cè)方法和依據(jù)。對(duì)于使用干細(xì)胞產(chǎn)品的患者，應(yīng)結(jié)合先進(jìn)的分析檢測(cè)技術(shù)充分評(píng)估引入遺傳性疾病的風(fēng)險(xiǎn)。
1.1.2 供者細(xì)胞
供者細(xì)胞獲取、保存、運(yùn)輸和入廠檢驗(yàn)等步驟應(yīng)經(jīng)過充分研究，明確標(biāo)準(zhǔn)操作規(guī)程和關(guān)鍵質(zhì)量控制參數(shù)，制定完善規(guī)范的同一性追溯系統(tǒng)和干細(xì)胞供應(yīng)質(zhì)量保證體系，應(yīng)完成必要的驗(yàn)證。用于獲取供者細(xì)胞的程序（例如手術(shù)，若可能應(yīng)指明使用的器械）、收集場(chǎng)所的名稱和位置、以及運(yùn)輸條件（如運(yùn)輸?shù)郊庸?chǎng)所進(jìn)行進(jìn)一步生產(chǎn)）等信息應(yīng)予明確。操作步驟應(yīng)進(jìn)行設(shè)計(jì)、研究與必要的驗(yàn)證，確保供者細(xì)胞獲取的工藝穩(wěn)定和質(zhì)量一致。供者細(xì)胞分離工藝，可能對(duì)干細(xì)胞產(chǎn)品質(zhì)量有影響，對(duì)變化分離工藝研究中建議采用具有代表性的供者來源的細(xì)胞，處理過程中關(guān)注進(jìn)行細(xì)胞鑒別、成活率及生長(zhǎng)活性、外源致病微生物和基本的干細(xì)胞特性檢測(cè)（如適用）。對(duì)供者細(xì)胞儲(chǔ)存和運(yùn)輸穩(wěn)定性進(jìn)行研究，對(duì)運(yùn)輸容器的性能進(jìn)行驗(yàn)證和定期確認(rèn)。采集到的細(xì)胞入廠時(shí)，根據(jù)工藝要求、產(chǎn)品特點(diǎn)，應(yīng)進(jìn)行細(xì)胞類型、數(shù)量、表型、活力、微生物等方面相應(yīng)的檢測(cè)，如細(xì)胞類型鑒別可通過相關(guān)的基因型和/或表型標(biāo)志物進(jìn)行鑒定和確認(rèn)，標(biāo)志物陽性的細(xì)胞比例可以作為預(yù)期細(xì)胞群指標(biāo)評(píng)估的依據(jù)。應(yīng)選擇合理的成品質(zhì)量相關(guān)的指標(biāo)，可適當(dāng)納入收集細(xì)胞質(zhì)量放行標(biāo)準(zhǔn)中。
1.1.3 細(xì)胞種子和細(xì)胞庫(kù)
細(xì)胞種子的技術(shù)要求如藥典通則所述，應(yīng)來源清楚、合法合規(guī)、檢定全面。人胚干細(xì)胞和誘導(dǎo)多能干細(xì)胞均應(yīng)建立細(xì)胞系/株（cell line）后作為細(xì)胞種子使用，可參照ICH Q5D和《生物制品生產(chǎn)檢定用動(dòng)物細(xì)胞基質(zhì)制備及檢定規(guī)程》對(duì)適合的供者細(xì)胞和生產(chǎn)用細(xì)胞種子進(jìn)行建系、建庫(kù)和檢定等，商業(yè)化生產(chǎn)規(guī)模的建庫(kù)頻率依據(jù)產(chǎn)品自身特性和批產(chǎn)量等確定。每個(gè)細(xì)胞庫(kù)（MCB和WCB）的歷史、來源、派生、特征，以及進(jìn)行檢測(cè)的頻率均應(yīng)說明。MCB檢測(cè)一般涉及產(chǎn)品的微生物學(xué)特征，包括無菌性、支原體、外源性病毒因子的體內(nèi)和體外檢測(cè)，包括對(duì)人體細(xì)胞進(jìn)行CMV、HIV-1和2、HTLV-1和2、EBV、B19、HBV和HCV檢測(cè)（若適用），或其他特定病原體。對(duì)于暴露于?；蜇i來源的組分（例如血清、血清組分、胰蛋白酶）的細(xì)胞系，建議包括對(duì)牛和/或豬來源的外源性因子的檢測(cè)。細(xì)胞鑒別包括通過細(xì)胞系的物理或化學(xué)特征（即表型、基因型或其他標(biāo)志物）區(qū)分特定細(xì)胞的檢測(cè)。細(xì)胞庫(kù)的純度應(yīng)包括對(duì)任何污染細(xì)胞的鑒別和定量、生長(zhǎng)活性（包括凍存后的復(fù)蘇活性）、增殖能力等，還應(yīng)檢測(cè)與產(chǎn)品治療性質(zhì)相關(guān)的細(xì)胞活性（例如iPSC的多能性）和細(xì)胞分化情況。
經(jīng)基因編輯的干細(xì)胞產(chǎn)品，需重點(diǎn)關(guān)注基因物質(zhì)的轉(zhuǎn)導(dǎo)效率、基因進(jìn)入細(xì)胞后的整合情況、調(diào)控元件、細(xì)胞的表型和基因型、目的基因的遺傳穩(wěn)定性、轉(zhuǎn)導(dǎo)用基因物質(zhì)的殘留量，以及病毒復(fù)制能力回復(fù)突變等。還有其他的一些信息，對(duì)判斷產(chǎn)品安全性也有幫助，比如：使用的培養(yǎng)條件，包括在生產(chǎn)期間使用的所有培養(yǎng)基和試劑/組分的記錄，以及相關(guān)檢驗(yàn)報(bào)告單（COA）的副本；MCB的冷凍保存、儲(chǔ)存和恢復(fù)，包括有關(guān)細(xì)胞密度、冷凍小瓶數(shù)量、儲(chǔ)存溫度和細(xì)胞庫(kù)位置的信息；多次傳代后MCB的遺傳和表型穩(wěn)定性，以及冷凍保存后細(xì)胞的活力。
若有兩級(jí)細(xì)胞庫(kù)系統(tǒng)（MCB和WCB），建議對(duì)WCB進(jìn)行以下檢測(cè)：體外外源性病毒因子檢測(cè)；細(xì)菌和真菌滅菌；支原體；和代表性的鑒別試驗(yàn)（例如Southern印跡、流式細(xì)胞儀）。
對(duì)于正在臨床試驗(yàn)中使用的干細(xì)胞樣品，制備完成時(shí)，應(yīng)從細(xì)胞分化角度應(yīng)對(duì)樣品進(jìn)行表觀和遺傳的穩(wěn)定性評(píng)估。在細(xì)胞基質(zhì)鑒定和檢測(cè)中使用更先進(jìn)方法和技術(shù)改進(jìn)時(shí)，應(yīng)開展新舊方法的全面對(duì)比驗(yàn)證和檢測(cè)橋接研究，證明新方法的專屬性、靈敏度和精密度至少與現(xiàn)有方法相當(dāng)。
1.1.4 傳代穩(wěn)定性
干細(xì)胞在傳代過程中可能存在不穩(wěn)定性，產(chǎn)生細(xì)胞異質(zhì)性，因此無論是建庫(kù)干細(xì)胞還是非建庫(kù)干細(xì)胞，均需對(duì)傳代穩(wěn)定性進(jìn)行充分規(guī)范的研究。傳代穩(wěn)定性研究時(shí)的傳代條件應(yīng)能代表實(shí)際臨床/商業(yè)化生產(chǎn)工藝，重點(diǎn)關(guān)注內(nèi)外源因子污染、細(xì)胞干性、多能性、成瘤/致瘤性等的變化，明確體外生產(chǎn)限傳代次和臨床使用代次。傳代穩(wěn)定性的研究項(xiàng)目常包括細(xì)胞 STR 鑒別、數(shù)量、形態(tài)、活率、群體倍增時(shí)間、純度、端粒酶活性等生長(zhǎng)特性穩(wěn)定性，也包括染色體核型和全基因測(cè)序遺傳穩(wěn)定性，還包括堿性磷酸酶染色/鼠畸胎瘤試驗(yàn)、免疫熒光法或 PCR 法檢測(cè)多能性基因表達(dá)等干性穩(wěn)定性等。
1.2 輔助細(xì)胞
在生產(chǎn)過程中若使用其它輔助細(xì)胞，也應(yīng)符合來源清晰可追溯、安全性風(fēng)險(xiǎn)可控、建立細(xì)胞庫(kù)分級(jí)管理的基本原則，這些輔助細(xì)胞可能殘留于干細(xì)胞終產(chǎn)品，應(yīng)作為雜質(zhì)，對(duì)其風(fēng)險(xiǎn)進(jìn)行研究控制。如對(duì)用于體外培養(yǎng)建立人胚干細(xì)胞及誘導(dǎo)多能細(xì)胞的人源或動(dòng)物源的飼養(yǎng)層細(xì)胞、誘導(dǎo)分化用內(nèi)胚層樣細(xì)胞等，應(yīng)需明確其選擇依據(jù)與合理性。根據(jù)外源性細(xì)胞在人體使用可能的相關(guān)風(fēng)險(xiǎn)因素，對(duì)細(xì)胞來源的供體、細(xì)胞分離、培養(yǎng)和建系過程應(yīng)能清楚溯源，對(duì)引入外源致病微生物的風(fēng)險(xiǎn)等進(jìn)行分析評(píng)估和檢測(cè)控制，對(duì)可能涉及細(xì)胞失活處理的工藝，如輻照或添加藥物等，以及輔助細(xì)胞的添加量和殘留量，應(yīng)經(jīng)過研究與驗(yàn)證，證明其不會(huì)對(duì)產(chǎn)品造成安全性和功能方面的影響。
輔助細(xì)胞可進(jìn)行建庫(kù)管理，并按藥典細(xì)胞庫(kù)檢驗(yàn)要求進(jìn)行全面檢驗(yàn)，特別是對(duì)人源或動(dòng)物源特異病毒的檢驗(yàn)。應(yīng)結(jié)合輔助細(xì)胞的性能等考察不同代次的輔助細(xì)胞庫(kù)細(xì)胞的穩(wěn)定性。
1.3 體外基因遞送與修飾系統(tǒng)
經(jīng)基因修飾和重編程技術(shù)獲得的干細(xì)胞產(chǎn)品，其上游生產(chǎn)均涉及體外基因遞送與修飾系統(tǒng)的參與，基因遞送與修飾系統(tǒng)的材料選擇（含病毒包裝細(xì)胞）、載體設(shè)計(jì)、工藝過程和質(zhì)量控制等藥學(xué)專業(yè)技術(shù)要求建議參照相關(guān)技術(shù)指南。體外基因遞送與修飾系統(tǒng)常采用整合型和非整合型的載體。整合型載體應(yīng)用較為廣泛，如慢病毒和逆轉(zhuǎn)錄病毒，但其隨機(jī)整合現(xiàn)象可能導(dǎo)致插入突變,干擾內(nèi)源基因的表達(dá)調(diào)控，這些病毒可能在終末分化的細(xì)胞中被異常再激活，成瘤風(fēng)險(xiǎn)可能更高。非基因整合型的重編程方法，如腺病毒、腺相關(guān)病毒和仙臺(tái)病毒可介導(dǎo)轉(zhuǎn)錄因子基因在宿主中瞬時(shí)表達(dá),通過影響細(xì)胞形態(tài)誘導(dǎo)細(xì)胞產(chǎn)生多潛能性，基因組整合風(fēng)險(xiǎn)較低，但仍需關(guān)注應(yīng)用此類重編程技術(shù)生產(chǎn)干細(xì)胞產(chǎn)品的成瘤性、非預(yù)期免疫反應(yīng)、介導(dǎo)轉(zhuǎn)錄因子的病毒殘留相關(guān)毒性等。另外，相對(duì)終末分化的免疫細(xì)胞，干細(xì)胞成瘤風(fēng)險(xiǎn)可能更高，需充分評(píng)估體外基因遞送與修飾系統(tǒng)在干細(xì)胞產(chǎn)品中的應(yīng)用對(duì)干細(xì)胞終產(chǎn)品和臨床安全性等的影響。
其它原材料
干細(xì)胞產(chǎn)品的原材料可以參照《中國(guó)藥典》相關(guān)要求進(jìn)行原材料選擇和供應(yīng)商審核。應(yīng)充分考慮原材料使用的必要性、安全性和合理性，以及大規(guī)模產(chǎn)品生產(chǎn)時(shí)的供應(yīng)連續(xù)性，部分原材料處在不斷更新優(yōu)化過程中，優(yōu)先選擇風(fēng)險(xiǎn)等級(jí)低，如采用藥用級(jí)的原材料，明確原材料來源、組成、用途、用量和質(zhì)量控制等情況，具備原材料來源證明、檢驗(yàn)報(bào)告書、包裝說明書、TSE/BSE分析聲明等文件。
若生產(chǎn)工藝中使用研究級(jí)試劑（如培養(yǎng)基、轉(zhuǎn)錄因子、化學(xué)小分子等），應(yīng)明確試劑的來源、生產(chǎn)工藝和性能的信息，并建立質(zhì)量鑒別程序，其中包括安全性檢測(cè)（無菌性、內(nèi)毒素、支原體和外源性因子）、功能分析、純度檢測(cè)和含量分析（例如殘留溶劑檢測(cè)），以證明試劑中無潛在有害物質(zhì)，并且生產(chǎn)使用時(shí)應(yīng)滿足無菌、無支原體、低內(nèi)毒素的相關(guān)要求。檢測(cè)的范圍將取決于特定試劑在生產(chǎn)工藝中的使用方式，還需考慮到技術(shù)發(fā)展對(duì)新外源因子的認(rèn)知。對(duì)于可能影響產(chǎn)品質(zhì)量和安全性（如致細(xì)胞突變）的所有原材料，需在最終產(chǎn)品或工藝的合理階段對(duì)殘留進(jìn)行評(píng)估和控制，并結(jié)合臨床使用劑量確定需要控制的殘留限度。有些高風(fēng)險(xiǎn)原材料可能需要開展動(dòng)物體內(nèi)的安全性評(píng)估。
生產(chǎn)中應(yīng)避免使用β-內(nèi)酰胺類抗生素，若其他環(huán)節(jié)不可避免使用抗生素，應(yīng)明確抗生素選擇依據(jù)、殘留控制和安全性評(píng)估等信息。
干細(xì)胞產(chǎn)品生產(chǎn)中應(yīng)量避免使用人源或動(dòng)物源性材料，盡可能采用組成成分明確的非動(dòng)物源性試劑，在早期研發(fā)篩選無人源或動(dòng)物源性物料生產(chǎn)工藝。若必須人源或動(dòng)物源性物料（如自體血清或自體血漿），應(yīng)充分說明其來源生物、銷售商/供應(yīng)商、原產(chǎn)國(guó)、生產(chǎn)工藝和質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)等信息，并設(shè)定合理的內(nèi)控檢測(cè)項(xiàng)目和可接受標(biāo)準(zhǔn)，嚴(yán)格控制外源因子污染（如外源病毒和朊病毒）和免疫原性等風(fēng)險(xiǎn)。對(duì)于由于使用人源或動(dòng)物源性材料，導(dǎo)致最終制劑被引入TSE/BSE的潛在風(fēng)險(xiǎn)，應(yīng)始終保持警覺。
有些干細(xì)胞產(chǎn)品可能與其他醫(yī)療器械、活性植入性醫(yī)療器械、基質(zhì)、微囊等材料形成組合產(chǎn)品，應(yīng)符合藥械組合產(chǎn)品的相關(guān)要求，需對(duì)組分進(jìn)行詳細(xì)描述和論證，說明每種成分的批準(zhǔn)狀況，并評(píng)價(jià)其安全性和預(yù)期用途的適用性，同時(shí)需進(jìn)行適當(dāng)類型的生物相容性研究，并評(píng)估對(duì)其他器械檢測(cè)是否充分，對(duì)控制器械組件的任何硬件和軟件的檢測(cè)是否充分。
生產(chǎn)過程中與中間樣品直接接觸的容器和密閉系統(tǒng)（培養(yǎng)瓶、一次性管路、生物反應(yīng)袋、濾器等）應(yīng)經(jīng)過嚴(yán)格的篩選，關(guān)注防止微生物污染和批次間交叉污染，開展耗材適用性和生物安全性評(píng)估，并基于風(fēng)險(xiǎn)評(píng)估開展充分的耗材相容性和密封性的研究。
（二）輔料
按照藥品開發(fā)的干細(xì)胞產(chǎn)品所用輔料的來源、用量和質(zhì)量控制應(yīng)基于風(fēng)險(xiǎn)評(píng)估的原則，經(jīng)處方篩選等進(jìn)行充分研究和驗(yàn)證，證明其使用的必要性、安全性和合理性，應(yīng)符合現(xiàn)行版《中國(guó)藥典》通則“生物制品生產(chǎn)用原材料及輔料質(zhì)量控制”的相關(guān)要求，盡量選擇低風(fēng)險(xiǎn)的輔料，優(yōu)先選用藥用級(jí)輔料。對(duì)于高風(fēng)險(xiǎn)等級(jí)的輔料，應(yīng)在產(chǎn)品研發(fā)的早期評(píng)價(jià)使用這些輔料的必要性, 并尋找其他替代物或替代來源，必要時(shí)，新型輔料應(yīng)開展適當(dāng)?shù)姆桥R床安全性研究。
六、生產(chǎn)工藝
干細(xì)胞產(chǎn)品工藝復(fù)雜，批間差別可能和一般藥物不同。對(duì)于按藥品開發(fā)的干細(xì)胞產(chǎn)品，其生產(chǎn)工藝的研究應(yīng)盡量遵循藥品生產(chǎn)工藝的一般規(guī)律，關(guān)注對(duì)生產(chǎn)工藝與產(chǎn)品質(zhì)量關(guān)系的研究，加強(qiáng)對(duì)工藝殘留去除的影響研究與驗(yàn)證，建立穩(wěn)健可靠的生產(chǎn)工藝。
（一）工藝開發(fā)
自研發(fā)早期需要逐步地明確生產(chǎn)工藝步驟和操作參數(shù)限定范圍，以及生產(chǎn)過程控制、可接受標(biāo)準(zhǔn)和廢棄標(biāo)準(zhǔn)等，保持工藝相對(duì)穩(wěn)定可靠，逐步確定產(chǎn)品目標(biāo)產(chǎn)品質(zhì)量概況（QTPP）和關(guān)鍵質(zhì)量屬性（CQA）。
干細(xì)胞產(chǎn)品生產(chǎn)工藝一般包括上游的細(xì)胞培養(yǎng)工藝和下游的制劑工藝，工藝流程可能包括細(xì)胞的復(fù)蘇、擴(kuò)增、誘導(dǎo)分化、基因遞送與修飾、收獲、罐裝、冷凍、存儲(chǔ)、運(yùn)輸?shù)戎械膸醉?xiàng)工藝步驟。應(yīng)明確生產(chǎn)規(guī)模和批次、批量的定義，關(guān)注上下游工藝規(guī)模的匹配性。如工藝過程中存在合批或分批的情況，需要開展充分的研究并制定相應(yīng)的原則。
細(xì)胞培養(yǎng)工藝
干細(xì)胞產(chǎn)品的質(zhì)量特性主要在細(xì)胞培養(yǎng)階段形成，此外，細(xì)胞培養(yǎng)體系和各步驟工藝參數(shù)均可能對(duì)來源不同的細(xì)胞的生長(zhǎng)分化特性、生物學(xué)功能和表觀遺傳特性產(chǎn)生影響，因此應(yīng)進(jìn)行全面的工藝研究。細(xì)胞培養(yǎng)工藝風(fēng)險(xiǎn)變量因素包括種子細(xì)胞庫(kù)、細(xì)胞分離（機(jī)械法、酶法）、培養(yǎng)容器(貼壁平層培養(yǎng)工藝的細(xì)胞匯合度與傳代/收獲時(shí)機(jī)，生物反應(yīng)器培養(yǎng)工藝的微載體選擇、反應(yīng)器參數(shù))、培養(yǎng)體系、接種/傳代密度及生長(zhǎng)動(dòng)力條件等，還包括起始細(xì)胞、感染復(fù)數(shù)、誘導(dǎo)體系和分化體系等,每個(gè)工藝階段中關(guān)鍵生產(chǎn)用材料/組分添加量、添加條件（時(shí)間、溫度）、離心洗滌條件和次數(shù)等。細(xì)胞培養(yǎng)工藝的質(zhì)量考察因素包括細(xì)胞活力（活細(xì)胞率、傳代代次、倍增時(shí)間），細(xì)胞特性（形態(tài)、表型和基因型、分化情況、生物學(xué)功能）、純度、轉(zhuǎn)導(dǎo)效率、重編程效率、病毒載體回復(fù)突變、多能性、成瘤/致瘤性、非預(yù)期細(xì)胞/影響、遺傳學(xué)和表觀遺傳學(xué)監(jiān)控等。干細(xì)胞產(chǎn)品的基因組積累的癌癥及遺傳病有關(guān)的基因突變風(fēng)險(xiǎn)可通過測(cè)序方法輔助分析。
制劑工藝
制劑處方和工藝應(yīng)根據(jù)臨床用藥要求，并結(jié)合產(chǎn)品自身的特性等進(jìn)行充分研究后確定。目的細(xì)胞成分是決定產(chǎn)品有效性的重要組分。制劑研究應(yīng)說明處方組成，明確細(xì)胞密度或細(xì)胞濃度等 CQA，明確最終制劑是新鮮細(xì)胞還是凍存細(xì)胞，制劑游離細(xì)胞形式還是與基質(zhì)結(jié)合，或是凍存細(xì)胞復(fù)蘇后經(jīng)洗滌等工藝處理再給予患者等。若最終產(chǎn)品以冷凍狀態(tài)運(yùn)輸?shù)脚R床研究中心，則應(yīng)在包括對(duì)產(chǎn)品運(yùn)輸方式的說明，并提供表明產(chǎn)品可被解凍的一致結(jié)果的數(shù)據(jù)，鼓勵(lì)采用先進(jìn)的帶有在線監(jiān)測(cè)的程序降溫設(shè)備開展不同降溫程序研究。
可根據(jù)生產(chǎn)批量、罐裝過程對(duì)細(xì)胞活力的影響選擇合理的制劑灌裝工藝。如制劑需要凍存，應(yīng)開展制劑的復(fù)蘇工藝研究，如凍存細(xì)胞復(fù)蘇后經(jīng)洗滌等工藝處理再給予患者，還應(yīng)開展洗滌工藝研究，并關(guān)注操作過程的安全性風(fēng)險(xiǎn)和剛復(fù)蘇細(xì)胞對(duì)洗滌工藝的耐受性。對(duì)于新型給藥裝置和給藥方式，需保證給藥準(zhǔn)確度。在輸入人體前，細(xì)胞制劑在醫(yī)院的處理時(shí)間和存放的條件也應(yīng)該明確規(guī)定。若自體或同種異體細(xì)胞產(chǎn)品在注射前進(jìn)行輻照以消滅復(fù)制能力以降低致癌風(fēng)險(xiǎn)，則應(yīng)提供數(shù)據(jù)以證明細(xì)胞在輻照后喪失復(fù)制能力，但仍保持其所需的特性。在干細(xì)胞產(chǎn)品回輸?shù)呐R床操作規(guī)程中，重點(diǎn)關(guān)注防范不同類型細(xì)胞自身的風(fēng)險(xiǎn)性和臨床使用過程中污染、感染和病原傳播的風(fēng)險(xiǎn)。
工藝過程
控制干細(xì)胞產(chǎn)品的生產(chǎn)的全過程應(yīng)通過合理可行的工藝控制參數(shù)和中間體控制限度進(jìn)行監(jiān)控。這些工藝控制參數(shù)和中間體控制限度包括了明確工藝步驟的培養(yǎng)時(shí)長(zhǎng)、生產(chǎn)周期和細(xì)胞限傳代次、生產(chǎn)中每個(gè)步驟的時(shí)間控制范圍等等。由于干細(xì)胞產(chǎn)品一般無法進(jìn)行終端除菌和除病毒工藝，外源因子污染風(fēng)險(xiǎn)高，生產(chǎn)過程中應(yīng)在適當(dāng)環(huán)節(jié)控制微生物安全性指標(biāo)（包括無菌、支原體、內(nèi)毒素等）。另外，有效的隔離措施對(duì)防止不同供者來源制品或不同批次產(chǎn)品的混淆、差錯(cuò)等有重要意義?？紤]到細(xì)胞在生產(chǎn)工藝過程中存在動(dòng)態(tài)可變性，對(duì)于可以表征細(xì)胞形態(tài)、活力、成瘤/致瘤性、表型特征(包括預(yù)期和非預(yù)期細(xì)胞群)、功能、遺傳穩(wěn)定，以及產(chǎn)品穩(wěn)定性的質(zhì)量參數(shù)，建議在關(guān)鍵生產(chǎn)環(huán)節(jié)或中間產(chǎn)物進(jìn)行中間過程控制，設(shè)置可接受標(biāo)準(zhǔn)，為糾偏限度提供依據(jù)。
采用基因轉(zhuǎn)導(dǎo)與修飾操作的風(fēng)險(xiǎn)較高，應(yīng)予重點(diǎn)關(guān)注，制定嚴(yán)格的風(fēng)險(xiǎn)控制點(diǎn)。應(yīng)明確轉(zhuǎn)導(dǎo)方式、遺傳操作方法和條件、目的基因轉(zhuǎn)導(dǎo)效率、在染色體的整合情況，并論述合理性。采用病毒載體的，還應(yīng)對(duì)病毒復(fù)制回復(fù)突變、插入突變等情況進(jìn)行研究和驗(yàn)證。對(duì)體外基因轉(zhuǎn)導(dǎo)與修飾前、后的細(xì)胞表型、基因型、功能、特性，以及工藝相關(guān)雜質(zhì)和非目標(biāo)細(xì)胞群的變化趨勢(shì)等，應(yīng)重點(diǎn)進(jìn)行研究、表征和/或驗(yàn)證，以確定工藝的穩(wěn)健性。
工藝變更
和其他藥品一樣，干細(xì)胞產(chǎn)品的制備工藝也會(huì)在生命周期中發(fā)生變更，這些變更的目的是對(duì)產(chǎn)品的工藝進(jìn)行優(yōu)化或提高質(zhì)量。需全面研究這些變更對(duì)干細(xì)胞產(chǎn)品的安全性、 特性、 純度和生物學(xué)活性等方面的影響，進(jìn)行工藝變更前后的可比性研究。對(duì)于干細(xì)胞產(chǎn)品，可比性研究的內(nèi)容應(yīng)該覆蓋到變更前后的原材料比對(duì)、工藝過程比對(duì)以及中間品/終產(chǎn)品的質(zhì)量屬性變化等，重點(diǎn)關(guān)注變更內(nèi)容、分析方法檢測(cè)應(yīng)能分辨產(chǎn)品質(zhì)量屬性變更以及產(chǎn)品的開發(fā)階段等，可以參考 ICHQ5E設(shè)置合理的可比性研究檢測(cè)指標(biāo)及可接受標(biāo)準(zhǔn)，將各階段代表性批次納入進(jìn)行研究，關(guān)注檢測(cè)項(xiàng)目的全面性、預(yù)設(shè)對(duì)比研究標(biāo)準(zhǔn)設(shè)置的合理性、檢測(cè)方法的有效性和檢測(cè)結(jié)果分析的客觀性等。對(duì)于開發(fā)過程中可能存在多個(gè)階段的生產(chǎn)工藝，如非注冊(cè)臨床樣品制備工藝、非臨床樣品制備工藝、臨床試驗(yàn)用樣品制備工藝、商業(yè)化生產(chǎn)工藝，應(yīng)具體說明各階段工藝之間的差異，并對(duì)變更前后的工藝開展可比性研究，分析工藝變更對(duì)產(chǎn)品質(zhì)量的影響，如有必要應(yīng)進(jìn)一步提供非臨床或人體比對(duì)研究數(shù)據(jù)。一般情況下在確證性臨床試驗(yàn)開展前完成所有預(yù)期變更。
（二）工藝驗(yàn)證
與一般藥品相比，干細(xì)胞產(chǎn)品的批間差異可能較大，工藝驗(yàn)證較為困難，但仍需保證產(chǎn)品一致性和質(zhì)量可控性。上市階段應(yīng)采用商業(yè)化生產(chǎn)規(guī)模下的生產(chǎn)工藝進(jìn)行連續(xù)多個(gè)批次干細(xì)胞產(chǎn)品的生產(chǎn)，并對(duì)各批次工藝和產(chǎn)品質(zhì)量進(jìn)行全面表征，確認(rèn)各工藝的穩(wěn)健性和產(chǎn)品質(zhì)量的一致性，工藝驗(yàn)證過程中建議關(guān)注關(guān)鍵生產(chǎn)階段對(duì)產(chǎn)品的基因型不穩(wěn)定性、成瘤/致瘤性和表型特征(包括預(yù)期和非預(yù)期細(xì)胞群)的體外評(píng)估，確保產(chǎn)品的安全性。另外，應(yīng)完成關(guān)鍵原材料生產(chǎn)工藝驗(yàn)證、中間體存儲(chǔ)條件和時(shí)間驗(yàn)證、培養(yǎng)基/緩沖液制備和放置條件驗(yàn)證、過濾器驗(yàn)證、運(yùn)輸驗(yàn)證、無菌模擬灌裝驗(yàn)證、清潔驗(yàn)證和容器密封完整性驗(yàn)證等。
和一般藥品一樣，干細(xì)胞產(chǎn)品在早期臨床試驗(yàn)時(shí)一般尚未進(jìn)行生產(chǎn)工藝驗(yàn)證，但應(yīng)在臨床試驗(yàn)前明確生產(chǎn)用原輔料的質(zhì)控標(biāo)準(zhǔn)，同時(shí)采取適當(dāng)?shù)墓に囘^程監(jiān)測(cè)和控制措施，以確保工藝符合臨床試驗(yàn)樣品的安全性要求。用于支持上市許可申請(qǐng)的確證性臨床試驗(yàn)樣品，應(yīng)能代表上市產(chǎn)品，其生產(chǎn)工藝必須進(jìn)行工藝驗(yàn)證以證明生產(chǎn)工藝可確保生產(chǎn)的一致性。商業(yè)化規(guī)模工藝驗(yàn)證應(yīng)關(guān)注實(shí)際同時(shí)生產(chǎn)最大產(chǎn)能的挑戰(zhàn)研究，考慮人員、設(shè)備、物料、環(huán)境、檢測(cè)等整體運(yùn)行能力對(duì)最大產(chǎn)能的支持能力。不同批次工藝性能和產(chǎn)品質(zhì)量的變化趨勢(shì)數(shù)據(jù)應(yīng)詳細(xì)記錄，開展全生命周期中的持續(xù)工藝確認(rèn)。
七、質(zhì)量研究與質(zhì)量控制
（一）質(zhì)量研究
干細(xì)胞產(chǎn)品具備多樣性、變異性、復(fù)雜性等特性，質(zhì)量研究應(yīng)選擇代表性的生產(chǎn)批次和合適的生產(chǎn)階段樣品（包括初始分離的細(xì)胞或細(xì)胞種子、細(xì)胞庫(kù)、中間產(chǎn)品、原液和制劑成品等）進(jìn)行研究，質(zhì)量研究?jī)?nèi)容應(yīng)盡量覆蓋細(xì)胞特性分析、理化特性分析、純度分析、安全性分析和有效性分析等方面，盡可能采用一系列先進(jìn)、正交的分析技術(shù)，且分析方法應(yīng)經(jīng)過研究確認(rèn)，確保方法適用可靠。
細(xì)胞特性分析
細(xì)胞形態(tài)：細(xì)胞的形態(tài)學(xué)分析對(duì)于處在不同生長(zhǎng)發(fā)育階段的細(xì)胞具有一定的指示作用，光學(xué)顯微鏡（可結(jié)合特異性染色）是常見的觀察細(xì)胞形態(tài)方法。
細(xì)胞活性：干細(xì)胞產(chǎn)品通常是活的細(xì)胞治療產(chǎn)品，可通過細(xì)胞活率、活細(xì)胞數(shù)、群體倍增時(shí)間、細(xì)胞周期等對(duì)細(xì)胞活性進(jìn)行綜合評(píng)價(jià)。
細(xì)胞鑒別：對(duì)細(xì)胞群體進(jìn)行鑒別是確保干細(xì)胞產(chǎn)品純度的重要方式，一般通過短串聯(lián)重復(fù)序列（short tandem repeats，STR）圖譜、中期染色體核型分析及同工酶譜分析或種屬遺傳多態(tài)性基因分析等方法對(duì)不同細(xì)胞交叉污染進(jìn)行評(píng)價(jià)，也可通過表面標(biāo)志物及特定基因進(jìn)行分析鑒別。
細(xì)胞標(biāo)志物檢測(cè)：細(xì)胞表達(dá)特定的標(biāo)志物是細(xì)胞特性的一部分，常通過選擇多種表面標(biāo)志物對(duì)細(xì)胞類型、多能性、譜系、終末分化和/或功能測(cè)定進(jìn)行干細(xì)胞產(chǎn)品的表征，相關(guān)分析檢測(cè)方法應(yīng)經(jīng)過規(guī)范驗(yàn)證。mRNA 標(biāo)記物與蛋白質(zhì)標(biāo)記物表達(dá)的有效相關(guān)性如果經(jīng)驗(yàn)證，可使用基于 mRNA 的標(biāo)記物輔助進(jìn)行細(xì)胞表征。
理化特性分析
一般理化特性分析需結(jié)合產(chǎn)品類型和制劑特征開展研究，可包括外觀、顏色、澄清度、pH、可見異物、滲透壓摩爾濃度、裝量等項(xiàng)目。
細(xì)胞純度分析
干細(xì)胞產(chǎn)品在生產(chǎn)過程中可能會(huì)引入非細(xì)胞雜質(zhì)（如理化雜質(zhì)）、細(xì)胞碎片或非功能所需細(xì)胞，影響產(chǎn)品生物學(xué)特性方面的純度和均一性，可能帶來安全性風(fēng)險(xiǎn)。對(duì)于這些非目的細(xì)胞成分，在工藝中應(yīng)予以去除，在質(zhì)量研究中予以檢測(cè)，并進(jìn)行定性/定量控制。通常純度分析的研究項(xiàng)目可能包括：活細(xì)胞比率、細(xì)胞亞群比率、功能性細(xì)胞比率、非目的細(xì)胞群體比率等。對(duì)于一些細(xì)胞與非細(xì)胞成分的制劑組合型產(chǎn)品，除細(xì)胞外還包含非細(xì)胞
